甲基化檢測分析服務
DNA甲基化研究是表觀遺傳學的重要內容，真核生物中的甲基化僅發生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾的方式在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控，在脊椎動物的胚胎發育過程中起著重要的調控作用，參與多種疾病包括各種腫瘤的發病機理，是目前表觀遺傳學研究的熱點。
主要技術原理
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而發生甲基化的胞嘧啶不變。根據某一待測位點或者調查的某一區域序列設計引物進行PCR擴增，通過PCR電泳、測序、熒光定量及質譜等方法對擴增產物進行檢測，根據檢測結果分析基因組甲基化的情況。
服務特點
精確度高，能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態
主要服務方案
1. 亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）
實驗原理：
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。針對要調查的區域設計BSP引物進行PCR擴增，對擴增產物進行測序就可以判斷哪些CpG位點發生了甲基化。根據測序方式不同，又分為以下幾種：
a. BSP直接測序法：對于BSP引物擴增產物直接進行測序；
b. BSP克隆測序法：將PCR產物克隆，之后提取質粒進行測序，此方法成功率高、檢測方便，適合常規數量樣本的特定靶標區域甲基化分析，是國際通用的甲基化分析金標準；
c. BSP高通量測序法：可以進行目標片段甲基化水平分析，也可進行全基因組甲基化水平分析。
技術特點：準確度高、能給甲基化位點精確定位、可重復性高
實驗流程：
（1）BSP引物設計：針對感興趣的基因區域進行BSP引物的設計（一般擴增產物不超過300bp）
（2）亞硫酸氫鹽處理基因組DNA：提取基因組DNA并進行亞硫酸氫鹽的轉化
（3）PCR擴增目的片段：BSP引物擴增感興趣的區域
（4）克隆到載體：將PCR產物純化后連接到T載體上
（5）克隆測序：挑取陽性*斑，提取質粒并測序
（6）序列分析：對測序的結果進行比對和甲基化分析（一般10個克隆子）
2. 熒光定量法（Methylight）
此方法利用TaqMan 探針和PCR引物來區分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亞硫酸氫鹽處理DNA片段，針對甲基化和未甲基化序列各設計一個探針，用不同的熒光標記，隨后開展實時定量PCR。如果探針與DNA雜交則釋放出熒光信號，根據熒光信號的強度比值計算甲基化水平。
技術特點
檢測通量高。早期由于沒有其它高通量的檢測方式，用熒光定量法針對較多的樣品進行檢測時，是一個比較好的檢測方案。但是該方法問題比較多，待檢測的區域只有一個甲基化位點時，探針的區分度不高。同時，為了達到比較好的區分效果，一般采用MGB探針，探針成本較高。如果只是檢測少量樣品，探針分攤成本很高?，F在針對較多的樣品待檢測時，通常都會采用高通量測序法，快速、準確，成本可控。
客戶提供
1 要調查的基因名稱、種屬
2 要調查的甲基化區域或位點
3 足量的科研樣本，保證樣本質量，提供清晰樣品編號
送樣要求
1 樣品要求：細胞≥105個；基因組DNA ≥5ug
2 所有樣品建議干冰或冰袋運輸，保證樣品質量
檢測周期
常規檢測任務2－4周內完成，具體時間根據樣本量和檢測的基因數而定。
下單流程
直接訂購：將需求內容給直接發送到support@generay.com.cn，或致電021-67840418
網上訂購：捷瑞網站首頁→訂單下載→下載甲基化服務訂單→填寫完整實驗信息→發送至support@generay.com.cn
報告內容
提供完整實驗報告、電泳圖、測序結果、序列比對結果、甲基化點狀圖、柱狀圖以及初步分析數據等。
注：可登陸捷瑞公司首頁下載甲基化檢測報告示例，流程如下：
登陸捷瑞公司首頁------技術支持----技術資料---下載甲基化檢測報告示例。
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